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产品详情

抗核抗体检测试剂盒

描述:抗核抗体检测试剂盒适用物种大鼠,人,小鼠,猪,狗,牛等正常动植物样本/血清/血浆/尿液/组织应用,仅供体外科研实验研究使用,严禁用于临床诊断。

更新时间:2022-02-22
产品型号:
厂商性质:经销商
详情介绍

  抗核抗体检测试剂盒说明书(仅供参考,我司工作人员)
 
  仅供科研实验研究使用,严禁用于临床诊断!
 
  l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人抗核抗体(ANA)。
 
  l有效期:6个月
 
  l保存条件:2-8℃
 
  [实验原理]
 
  抗核抗体检测试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人抗核抗体(ANA)获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗核抗体(ANA)正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

 
 
  [样本处理及要求]
 
  1.  血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
 
  2.  血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
 
  3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
 
  4.  细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
 
  注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
  [需要而未提供的试剂和器材]
 
  1.酶标仪(450nm)
 
  2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
 
  3.37℃恒温箱
 
  4.蒸馏水或去离子水
 
  [试剂盒组成]
 

备注:
 
  1.  标准品浓度依次为:12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL
 
  2.  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
 
  [注意事项]
 
  1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
 
  2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
 
  3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
 
  4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
 
  5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
 
  6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
 
  7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
 
  8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
 
  9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
 
  [试剂准备]
 
  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
 
  20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
 
  [操作步骤]
 
  1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
 
  2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
 
  3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
 
  4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
 
  5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
 
  6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
 
  7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
 
  8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
 
  9)在450nm波长处测定各孔的OD值。
 
  [实验结果计算]
 
  以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
 
  [试剂盒性能]
 
  1. 检测范围:0.375 ng/mL – 12 ng/mL。
 
  2. 灵敏度:检测浓度小于0.1 ng/mL。
 
  3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
 
  4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
 
 

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