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小鼠检测试剂盒的样品稀释和试剂准备方法

点击次数:38发布时间:2022-07-20
 
  小鼠检测试剂盒的样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠CD48呈正相关。
 
  小鼠检测试剂盒的样品稀释:
 
  用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同,分别采取不同的稀释方案,以下方案仅供参考,样品的稀释应有详细记录。
 
  高:指待测因子在40~400ng/ml。一般按1:100稀释。297μL样品稀释液加3μL样品。
 
  中:指待测因子在4~40ng/ml。一般按1:10稀释。225μL样品稀释液加25μL样品。
 
  低:指待测因子在62.5~4000pg/ml。按1:2稀释。100μL样品稀释液加100μL样品。
 
  特低:指待测因子≤62.5pg/ml。样品一般不做稀释,或按1:2稀释。
 
  小鼠检测试剂盒的试剂准备:
 
  小鼠标准品的稀释和使用:在使用前2小时内准备。试剂盒提供2管标准品,每管10ng,每次使用1管。
 
  配制10,000pg/ml标准品:取1mL样品稀释液加入标准品管内,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解。
 
  配制4000pg/ml标准品:取0.4mL10,000pg/ml的标准品加入有0.6mL样品稀释液的Eppendorf管中,混匀,做上标记。
 
  配制2000pg/ml~62.5pg/ml标准品:准备6只Eppendorf管,每管加0.3mL样品稀释液,分别标记上2000pg/m,1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml。取0.3mL4000pg/ml的标准品加入标记2000pg/ml的管中,混匀后同样取出0.3mL,加入下一只管中。余同此类推,直到最后一只样品管。
 
  注意:已经稀释的标准品(10,000pg/ml),应在12小时内使用。-20℃冷冻保存条件下,2天内可以使用,但不得反复冻融。
 
  生物素标记抗小鼠CD48抗体工作液:在使用前2小时内准备。
 
  根据每孔需要100μL计算总的用量(实际配制时应多配制100~200μL)。
 
  按1μL生物素标记抗小鼠CD48加抗体稀释液99μL的比例配制工作液。轻轻混匀。
 
  亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备:在使用前1小时内准备。
 
  根据每孔需要100μL计算总的用量(实配时应多配制100~200μL)。
 
  按1μL亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加ABC稀释液99μL的比例配制工作液。轻轻混匀。
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